導(dǎo)語(yǔ)：新病理制片技術(shù)研究論文一文來(lái)源于網(wǎng)友上傳，不代表本站觀點(diǎn)，若需要原創(chuàng)文章可咨詢客服老師，歡迎參考。

【關(guān)鍵詞】病理學(xué)；病理制片；病理診斷

病理學(xué)檢查對(duì)臨床診斷、疾病鑒別診斷、預(yù)后判斷都有重要意義，對(duì)于某些疾病的診斷、研究更是具有決定性的作用。而一張高質(zhì)量的病理切片對(duì)于疾病的病理診斷起著不可忽視的決定性作用。近2年,筆者在使用自動(dòng)組織脫水機(jī)過(guò)程中，對(duì)脫水劑、透明劑、浸蠟劑使用等進(jìn)行了改進(jìn)，對(duì)實(shí)驗(yàn)步驟和操作方法等細(xì)節(jié)方面進(jìn)行了改良，提高了切片的染色效果和整體質(zhì)量，明顯降低脫片率，從而提高石蠟切片質(zhì)量。并且在一定程度上減少了試劑揮發(fā)對(duì)人體和環(huán)境造成的傷害與污染?，F(xiàn)將操作方法介紹如下。

1操作方法

1.1固定甲醛固定液，其滲透性強(qiáng)，固定均勻，使組織縮小，適合大多數(shù)組織固定。

1.2脫水脫水劑乙醇。乙醇脫水的初始濃度為80%,避免乙醇濃度過(guò)低而增加脫水時(shí)間或乙醇濃度過(guò)高致組織發(fā)脆而影響切片。溫度對(duì)乙醇滲透脫水的影響很大，主要是指無(wú)水乙醇。當(dāng)室內(nèi)溫度>30℃時(shí)組織內(nèi)水分子與乙醇之間運(yùn)動(dòng)加快,可縮短組織脫水時(shí)間。當(dāng)室內(nèi)溫度<10℃時(shí)組織內(nèi)水分子與乙醇之間運(yùn)動(dòng)變慢,組織脫水時(shí)間就要延長(zhǎng)。為此我們?cè)谟米詣?dòng)脫水機(jī)對(duì)組織脫水時(shí)，對(duì)最后二缸無(wú)水乙醇，根據(jù)溫度變化調(diào)整脫水時(shí)間，一般在2h左右。

1.3透明組織透明劑以二甲苯為佳，因?yàn)樗c脫水劑和石蠟兼容性較好，對(duì)組織染色影響小，特別在免疫組織化學(xué)酶標(biāo)記中對(duì)抗原的破壞較小。脫水機(jī)上應(yīng)用二缸試劑，總的透明時(shí)間控制在20～30min(一般缸10min，二缸15min為好)。

1.4在脫水機(jī)上一般用三缸蠟，第一缸蠟必須含有一定比例二甲苯(指新配制石蠟時(shí)用)，以便石蠟?zāi)軡u進(jìn)地置換出透明劑，時(shí)間可控制在1h左右。第二缸蠟和第三缸蠟可用純蠟以便把組織中二甲苯全部置換出，總時(shí)間可在3h以上，浸蠟溫度應(yīng)與蠟的熔點(diǎn)相同。另外，要注意第三缸石蠟熔點(diǎn)必須與包埋的石蠟熔點(diǎn)相同。為了保持第三缸石蠟純度可1～2月調(diào)換1次，更換時(shí)可將第一缸石蠟倒掉，把第二、第三缸分別移做第一、第二缸石蠟，只更新第三缸石蠟即可。在使用自動(dòng)組織脫水機(jī)時(shí)，一定要對(duì)脫水機(jī)內(nèi)試劑使用情況有所了解，做到定期更換試劑，以確保組織制片質(zhì)量，使脫水機(jī)處理組織達(dá)到最佳狀態(tài)。

1.5切片要求切片的第一步必需粗切。粗切的厚度大約在60～100μm左右，質(zhì)地較硬的組織或較小的組織應(yīng)再薄一些，粗切致組織全部暴露后，才進(jìn)行細(xì)切。細(xì)切至組織塊表面均勻一致。切片厚度一般為3～5μm。切片的要求是完整、薄、均勻。切下的片膜其大小形狀應(yīng)與組織塊一致，切片的不完整，常會(huì)將重要病變遺漏，導(dǎo)致誤診、漏診。在切片放蠟塊時(shí)，應(yīng)注意組織包埋的方向，組織的層次、纖維、肌肉等的走向應(yīng)與切片刀平行。

1.6展片與撈片展片水溫應(yīng)在42℃～47℃之間，這主要和包埋蠟的熔點(diǎn)有關(guān)，水溫過(guò)高，會(huì)引起組織細(xì)胞散片，水溫過(guò)低，切片皺摺無(wú)法攤平。包埋蠟中如有二甲苯，也會(huì)造成石蠟溶解現(xiàn)象。撈片時(shí)玻片要干凈，要選擇那些完整、無(wú)皺摺的切片，粘貼于玻片中1/3和下1/3的中間。

1.7烤片和脫蠟烤片，一般在60～65℃烤片0.5～1h左右，溫度過(guò)高，會(huì)引起切片細(xì)胞收縮；時(shí)間太短(少于20min)，容易造成脫片。脫蠟也相當(dāng)重要，如果脫蠟不干凈,切片不易著色或著色不勻，所以，脫蠟用的二甲苯要經(jīng)常更換，一般用3道二甲苯，每500ml液體，處理5000張切片后更換1次為宜。

1.8染色蘇木素染色時(shí)間要根據(jù)染料的新舊、溫度、切片的類型而定，一般為3～5min。經(jīng)水略洗后，用鹽酸酒精分化，分化程度必須用顯微鏡控制。染色理想的切片在顯微鏡下應(yīng)是：細(xì)胞核與細(xì)胞漿應(yīng)藍(lán)紅相映，鮮艷美麗；核漿對(duì)比明顯，核膜及核染色質(zhì)顆粒清晰可見(jiàn)。

1.9脫水和封片(方法略)

2小結(jié)

用以往方法(組織經(jīng)10%甲醛固定后直接用手動(dòng)脫水)所做的384例快速石蠟切片中，有69例切片不完整、染色較差，占18%；用改進(jìn)后的方法所做的248例石蠟切片中僅有10例切片不完整、染色稍差，占4%；操作所用時(shí)間縮短，提高了病理制片的質(zhì)量。