分子生物論文范文
時間:2023-04-02 15:27:14
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篇1
1.1采集地點(diǎn)的選擇伊寧縣位于東經(jīng)80°13′~82°42′,北緯43°35′~44°29′之間,東鄰尼勒克縣,西與伊寧市和霍城縣接壤,南鄰伊犁河,與察布查爾、鞏留兩縣隔河相望。同時,位于伊犁河谷中部,水草豐富,境內(nèi)的伊寧口岸是伊犁地區(qū)重要的貿(mào)易口岸。
1.2實(shí)驗(yàn)材料
1.2.1蜱的來源2013年4-5月,從伊寧縣的2個采集點(diǎn)、2個綿羊群,每群>30只,均未藥浴,采集其體表寄生蜱,共獲得硬蜱324只,放置于潮濕陰暗處,以保持其存活。
1.2.2主要試劑PCR所用試劑均購自上海生工生物工程技術(shù)服務(wù)有限公司;DNA提取試劑盒(DNeasyBloodTissueKit)購自德國Qiagen公司;其他試劑均為分析純。
1.3實(shí)驗(yàn)方法
1.3.1蜱種鑒定參照《中國經(jīng)濟(jì)昆蟲志》[9],用普通解剖顯微鏡將324只蜱進(jìn)行形態(tài)學(xué)鑒定,初步分類后,從中選取50只用配備數(shù)碼照相功能的解剖顯微鏡(LEICAM165C)拍攝圖片,對蜱的盾板、假頭、假頭基、肛側(cè)板、氣門板、第一緣垛、孔區(qū)(雌蜱)等形態(tài)進(jìn)行對比觀察并測量[11]。1.3.2蜱的處理和DNA提取將蜱標(biāo)本分別依次用濃度為70%、50%、30%、10%的乙醇溶液于37℃搖床中振蕩沖洗1h,再用超純水反復(fù)沖洗,干燥。最后置于消毒滅菌的1.5mlEP管中。按照DNA提取試劑盒使用說明書提取蟲體基因組DNA,置-20℃保存?zhèn)溆谩?/p>
1.3.3基因擴(kuò)增用上游引物5′-CTGCTCAATGATTTTTTAAATTGCTGTGG-3′,下游引物5′-CCGGTCTGAACTCAGATCAAGT-3′擴(kuò)增線粒體16SrRNA序列[12];上游引物5′-CAAAAWCCTGGTAAAATTAAA-3′和下游引物5′-GCACTATCAAGCAACACGACT-3′擴(kuò)增COⅠ序列[10]。25μlPCR反應(yīng)體系:模板1.5μl(約50ng),上游和下游引物各0.75μl(75pmol),50mmol/LKCl,10mmol/LTris⁃HCl(pH8.3),1.5mmol/LMgCl2,1單位TaqDNA聚合酶。PCR反應(yīng)循環(huán)參數(shù)為:①16SrRNA為94℃預(yù)變性5min,92℃變性30s,54℃退火30s,72℃延伸30s,共38個循環(huán),72℃終延伸8min。②COⅠ為94℃預(yù)變性5min,92℃變性30s,50℃退火30s,72℃延伸60s,共38個循環(huán),72℃終延伸8min。擴(kuò)增片段后送上海生工生物工程技術(shù)服務(wù)有限公司測序。1.3.4序列分析及系統(tǒng)進(jìn)化樹構(gòu)建結(jié)合GenBank登錄的圖蘭扇頭蜱的16SrRNA和COⅠ參考序列,將本實(shí)驗(yàn)PCR擴(kuò)增的6條16SrRNA及6條COⅠ序列測序結(jié)果與參考序列比對,運(yùn)用Mega5.0軟件的ClustalX程序分析,計(jì)算遺傳距離并構(gòu)建遺傳進(jìn)化樹。
2結(jié)果
2.1蜱種鑒定所鑒定蜱共324只(168、156),蟲體體型較小,雌蟲體長3.2~5.5mm,雄蟲體長2.9~3.6mm,呈褐色,背腹扁平似卵圓形,芝麻至米粒大,雌蜱飽血后可膨脹達(dá)蓖麻籽大。體分為假頭和軀體兩個主要部分(圖1A)。假頭基呈六角形,側(cè)角明顯,后緣微凹(圖1B)。雄蜱盾板覆蓋整個背部,雌蜱盾板覆蓋背前部,前部較窄,后部圓鈍,盾板遍布刻點(diǎn),以細(xì)刻點(diǎn)居多,粗刻點(diǎn)少而零散(圖1C)。眼卵圓,靠近盾板前部邊緣。須肢粗短,中部最寬,前端稍窄。雄蜱氣門板長卵形(圖1D)。體端有緣垛,中垛大于邊垛,常有尾突(圖1E)。有肛溝,雄性肛側(cè)板后緣內(nèi)斜明顯,內(nèi)緣具角突,長約為寬的2.5~3.0倍,內(nèi)緣中部稍凹,后緣向內(nèi)顯著傾斜,其后方凸角明顯(圖1F)。結(jié)合有關(guān)文獻(xiàn)[9,13]認(rèn)為伊寧縣的蜱具有硬蜱科扇頭蜱屬圖蘭扇頭蜱的特征。但由于吸血、飽血雌蜱及部分未成熟或形態(tài)變異的雄蜱,僅用傳統(tǒng)形態(tài)學(xué)分類方法不能準(zhǔn)確區(qū)分。因此,從324只中選出6只雌雄分別具有形態(tài)差異的蜱(4、2),根據(jù)采集地點(diǎn)分別將其命名為YN-1、YN-2、YN-3、YN-4、YN-5和YN-6。YN-1為當(dāng)?shù)氐湫托坌詧D蘭扇頭蜱;YN-2和YN-3為半飽血雌蜱,因其腹部吸血膨脹已無法觀察緣垛,肛側(cè)板和副肛側(cè)板難以區(qū)分形態(tài)且邊界不清;YN-4、YN-5和YN-6為部分形態(tài)特征改變雄蜱,YN4和YN5體端較寬似倒置三角形與典型的圖蘭扇頭蜱卵圓形體端不同,且YN5氣門板呈長逗點(diǎn)形與血紅扇頭蜱氣門板相似;YN6肛側(cè)板后緣圓鈍,凸角不明顯。因此對這6只蜱采用分子生物學(xué)方法進(jìn)一步分析,對上述形態(tài)學(xué)鑒定結(jié)果進(jìn)一步驗(yàn)證。
2.2分子生物學(xué)鑒定
2.2.1PCR擴(kuò)增通過PCR擴(kuò)增上述形態(tài)學(xué)差異較大的6只圖蘭扇頭蜱線粒體DNA,產(chǎn)物經(jīng)1%瓊脂糖凝膠電泳分析,均獲得特異性很好的PCR產(chǎn)物,與預(yù)期目的片段一致(16SrRNA約為460bp,COⅠ約為760bp)。
2.2.2圖蘭扇頭蜱16SrRNA和COⅠ基因片段組成利用Mega5.0軟件計(jì)算6只圖蘭扇頭蜱的16SrRNA和COⅠ基因片段堿基組成。16SrRNA基因片段A、T、C、G的平均堿基含量分別為36.68%、37.12%、10.7%和15.5%,堿基A+T平均含量是73.78%。COⅠ基因片段A、T、C、G的平均堿基含量分別為38.56%、31.78%、14.12%和15.54%,堿基A+T平均含量是70.34%。
2.2.3圖蘭扇頭蜱基因序列比對及系統(tǒng)進(jìn)化樹運(yùn)用Mega5.0軟件的ClustalX程序進(jìn)行多重序列比對后,16SrRNA獲得2種不同序列,并登錄GenBank,登錄號分別為KF547987和KF547989;COⅠ獲得3種不同序列,登錄號分別為KF688136、KF688137和KF688138。各結(jié)合GenBank登錄的3種扇頭蜱的參考序列構(gòu)建系統(tǒng)進(jìn)化樹。6只圖蘭扇頭蜱16SrRNA基因片段的遺傳變異很小,共檢測出2個單倍型,1個變異位點(diǎn)。其中YN-2、YN-3、YN-4和YN-5序列相同,為一種單倍型;YN-1、YN-6在216位點(diǎn)處為轉(zhuǎn)換位點(diǎn)(T-C),為一種單倍型?;蛐蛄斜容^結(jié)果顯示同源性均在99.5%以上,遺傳距離為0.3%~0.5%。而上述6只圖蘭扇頭蜱的COⅠ基因片段序列變異較大,共檢測出3個單倍型,4個變異位點(diǎn)。YN-1、YN-2和YN-6序列相同,為一種單倍型;YN-3和YN-5檢測到3個變異位點(diǎn),均為轉(zhuǎn)換位點(diǎn)(A-G),無插入/缺失和顛換現(xiàn)象;YN-4在上述變異基礎(chǔ)上,于574位點(diǎn)處發(fā)生轉(zhuǎn)換(A-G)?;蛐蛄斜容^結(jié)果顯示同源性均在98.6%以上,遺傳距離為0.3%~1.9%。
3討論
篇2
[摘要] 生物化學(xué)與分子生物學(xué)研究生的培養(yǎng),在該學(xué)科研究生碩士點(diǎn)的建設(shè)中占重要地位,本文對醫(yī)學(xué)院校生物化學(xué)與分子生物學(xué)研究生的培養(yǎng)實(shí)踐進(jìn)行反思,旨在提高研究生論文質(zhì)量。
[關(guān)鍵詞] 生物化學(xué);論文質(zhì)量;醫(yī)學(xué)院校研究生
[中圖分類號] G642[文獻(xiàn)標(biāo)識碼] C [文章編號]1673-7210(2011)08(a)-119-02
Study on the degree thesis quality of biochemistry and molecular biology students in medical couege
FU Xinhua, YANG Xiaoyun, WANG Shouxun*
Department of Biochemistry and Molecular Biology, Weifang Medical College, Shandong Province, Weifang 261053, China
[Abstract] Training graduate students of biochemistry and molecular biology have an important station in biochemistry development. We reflected the practice of biochemistry and molecular biology training in medical graduate students to improve the quality of thesis.
[Key words] Biochemistry; Thesis quality; Medical graduate student
當(dāng)前我國社會競爭日趨激烈,從而加大了對高學(xué)歷、高素質(zhì)人才的需求,高校招生規(guī)模的年平均增長率是26.9%。在此形勢下,如何調(diào)整研究生的培養(yǎng)目標(biāo)和教育模式,已成為各大高校研究生教育需要解決的當(dāng)務(wù)之急,因此探討研究生培養(yǎng)目標(biāo)和教育模式具有重要意義。
醫(yī)學(xué)生物化學(xué)與分子生物學(xué)研究生的培養(yǎng)和教育是造就高層次人才的渠道之一,如何加強(qiáng)對醫(yī)學(xué)研究生培養(yǎng)全過程的質(zhì)量監(jiān)控,保證培養(yǎng)質(zhì)量,是目前高校值得研究的重要課題。其中,建立醫(yī)學(xué)院校生物化學(xué)與分子生物學(xué)研究生教學(xué)督導(dǎo)制度及對研究生學(xué)位論文進(jìn)行質(zhì)量監(jiān)控,是保障培養(yǎng)質(zhì)量的有效途徑[1-2]。
1 我校生物化學(xué)與分子生物學(xué)研究生培養(yǎng)存在的問題
當(dāng)前我校生物化學(xué)與分子生物學(xué)專業(yè)研究生實(shí)際培養(yǎng)工作中,存在一些問題,主要表現(xiàn)在:
1.1 對研究生培養(yǎng)環(huán)節(jié)的監(jiān)控不到位
長期以來,研究生培養(yǎng)多注重對結(jié)果的評價,以研究成果、畢業(yè)論文和就業(yè)狀況等來衡量研究生培養(yǎng)的優(yōu)劣,而對研究生培養(yǎng)過程的監(jiān)管不足。
1.2 導(dǎo)師對研究生培養(yǎng)過程的指導(dǎo)投入不足
隨著研究生招生規(guī)模的擴(kuò)大,每位導(dǎo)師指導(dǎo)的學(xué)生數(shù)量增多,導(dǎo)師整體負(fù)荷增大,師生間的直接互動減少,加之導(dǎo)師工作忙,事務(wù)多,時間和精力投入都難以到位,以致出現(xiàn)一些研究生培養(yǎng)“放羊”現(xiàn)象,如課題未經(jīng)論證、開題報(bào)告時間滯后、畢業(yè)論文答辯匆忙等,從而制約了研究生的培養(yǎng)質(zhì)量。
1.3 研究生學(xué)位論文質(zhì)量有下滑趨勢
招生規(guī)模擴(kuò)大以后,導(dǎo)師壓力增大,難以保證每個學(xué)生高質(zhì)量的完成學(xué)位論文,造成同年畢業(yè)的研究生論文質(zhì)量良莠不齊。
2 提高醫(yī)學(xué)院校生物化學(xué)與分子生物學(xué)研究生學(xué)位論文質(zhì)量的幾點(diǎn)思考
研究生階段的教育重在培養(yǎng)學(xué)生的科研能力,而學(xué)位論文能全面衡量研究生的綜合水平。其中,論文選題和開題的嚴(yán)格把關(guān)是學(xué)位論文質(zhì)量管理的一個重要方面,對保證和提高學(xué)位論文質(zhì)量至關(guān)重要[3-4]。本文分析了醫(yī)學(xué)院校生物化學(xué)與分子生物學(xué)碩士學(xué)位論文各環(huán)節(jié)存在的問題,提出了加強(qiáng)其質(zhì)量監(jiān)控的具體措施。
2.1 美國研究生教育模式
美國研究生教育在世界研究生教育中占重要地位,19世紀(jì)以來,美國以培養(yǎng)大學(xué)教師和高水平研究人才為研究生教育目標(biāo)。研究生教育便擔(dān)負(fù)起培養(yǎng)各學(xué)科高級研究人才的任務(wù)。從20世紀(jì)70年代至今,美國研究生的教育質(zhì)量不斷提高,美國研究生教育始終保持較高的整體質(zhì)量、宏觀質(zhì)量和體系質(zhì)量[3]。
目前美國研究生教育的評估力量主要來源于社會和高校自身,且以社會評估為主。內(nèi)部評估遵循“寬進(jìn)嚴(yán)出”的原則,從招生、課程學(xué)習(xí)、科學(xué)研究、中期考核、考試、論文寫作、答辯等方面進(jìn)行質(zhì)量控制[4]。美國通常采用高校(系、科)評分的方法評價高校質(zhì)量,通過評價高等院校的實(shí)際辦學(xué)水平及在大學(xué)群與社會中的相對地位來促進(jìn)其質(zhì)量提升。培養(yǎng)過程有規(guī)范性要求,并嚴(yán)格按計(jì)劃和程序?qū)嵭刑蕴璠5]。
2.2 提高我國醫(yī)學(xué)院校生物化學(xué)與分子生物學(xué)研究生論文質(zhì)量的建議
根據(jù)我國的研究生培養(yǎng)目標(biāo),研究生應(yīng)當(dāng)具備從事科學(xué)研究和獨(dú)立承擔(dān)專門技術(shù)工作的能力。研究生教育規(guī)模迅速擴(kuò)大,質(zhì)量問題日益凸顯,引起教育界及社會各界的關(guān)注[6]。質(zhì)量管理系統(tǒng)的功能是對高校研究生培養(yǎng)質(zhì)量保障系統(tǒng)的具體組織與執(zhí)行,它直接決定了研究生培養(yǎng)質(zhì)量保障系統(tǒng)功能的發(fā)揮。
2.2.1 研究生培養(yǎng)中期考核培養(yǎng)過程的督導(dǎo)包括導(dǎo)師遴選、培養(yǎng)條件、培養(yǎng)方案、課程設(shè)置等的監(jiān)督、檢查,重點(diǎn)是中期考核。實(shí)施中期考核是研究生培養(yǎng)過程的重要環(huán)節(jié),中期考核未達(dá)標(biāo)者,可給予一定形式的警示,令其限期達(dá)標(biāo)。
2.2.2 對生物化學(xué)與分子生物學(xué)培養(yǎng)方案與研究生培養(yǎng)計(jì)劃的審查與督導(dǎo)審查與督查是督導(dǎo)工作的重點(diǎn)。一方面對其培養(yǎng)方案進(jìn)行審查,另一方面查閱所選學(xué)位點(diǎn)的研究生培養(yǎng)計(jì)劃,重點(diǎn)審查其培養(yǎng)目標(biāo)是否合適,課程設(shè)置與安排是否合理等。
2.2.3 加強(qiáng)教學(xué)與管理研究生部加強(qiáng)學(xué)籍管理、宏觀管理、質(zhì)量檢查與評估等工作,全面監(jiān)督課程設(shè)置、教學(xué)實(shí)施、成績考核、論文評審、學(xué)位答辯等工作。
2.2.4 學(xué)位論文質(zhì)量監(jiān)控是重中之重學(xué)位論文監(jiān)控包括開題報(bào)告、論文把關(guān)、質(zhì)量評定、論文質(zhì)量等級及學(xué)位授予。督導(dǎo)的重點(diǎn)是檢查畢業(yè)論文質(zhì)量,進(jìn)一步完善論文“盲審”制度能更好地確保畢業(yè)論文質(zhì)量。①開題報(bào)告質(zhì)量監(jiān)控:開題報(bào)告是提高論文質(zhì)量的重要環(huán)節(jié)。開題報(bào)告重點(diǎn)檢查文獻(xiàn)是否滿足論文課題的要求、有無書面報(bào)告書等。中期的學(xué)術(shù)報(bào)告或階段總結(jié)重點(diǎn)檢查論文進(jìn)展情況、后期計(jì)劃、存在問題及指導(dǎo)小組人員的評議意見,以促進(jìn)論文質(zhì)量的提高。②學(xué)位論文質(zhì)量監(jiān)控:研究生學(xué)位論文水平是評估研究生質(zhì)量的重要指標(biāo)之一,必須加強(qiáng)對研究生學(xué)位論文的質(zhì)量監(jiān)控與督導(dǎo)。學(xué)位論文的質(zhì)量監(jiān)控重點(diǎn)是檢查論文質(zhì)量,協(xié)助研究生部對論文進(jìn)行質(zhì)量抽查,將該部分論文送予外校專家進(jìn)行雙盲審查,查閱專家評審意見,并參加論文答辯會,提出意見,供導(dǎo)師、管理部門參考和質(zhì)量抽查,從而保證論文質(zhì)量。
2.2.5 開展對生物化學(xué)與分子生物學(xué)導(dǎo)師的督導(dǎo)工作著重從研究生的課堂、教學(xué)、文獻(xiàn)綜述、開題報(bào)告、論文中期檢查、學(xué)術(shù)活動、學(xué)術(shù)交流、學(xué)位論文質(zhì)量與論文答辯等方面對導(dǎo)師工作進(jìn)行督導(dǎo)檢查。
本文通過對生物化學(xué)與分子生物學(xué)專業(yè)研究生培養(yǎng)過程存在問題的分析,圍繞加強(qiáng)研究生培養(yǎng)過程管理、全面提高研究生培養(yǎng)質(zhì)量,從控制的重點(diǎn)、手段和主體等方面提出了進(jìn)一步實(shí)施研究生培養(yǎng)質(zhì)量監(jiān)督控制的相關(guān)措施,以期對研究生培養(yǎng)工作有所裨益。
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